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摘　要：为检验猪链球菌灭活疫苗(猪链球菌2型＋马链球菌兽疫亚种)免疫效果，研制了5批疫苗，对妊娠母猪、保育猪等进行免疫攻毒试验，检验疫苗的主动免疫和被动免疫效果，结果表明，对哺乳仔猪的平均保护率达到88.09%(SS2)和79.06%(SeZ)，对保育猪的平均保护率达到90%(SS2)和76.7%(SeZ)。

关键词：猪；链球菌；疫苗；免疫效果

猪链球菌病由多种猪源链球菌引起，临床表现为急性败血症、关节炎、脑膜炎及急性死亡，是猪的主要传染病之一。近年来猪链球菌病在我国流行日趋严重，病原亦发生变化，其中最为重要的是猪链球菌2型呈世界范围分布，是一种人兽共患病原菌，该病曾先后在江苏南通、四川资阳等地引发公共卫生事件，造成极大的社会恐慌，严重危害养猪业的发展和人民的身体健康[1]。摸清该病的流行规律，阐明致病机理，建立快速检测方法，研制高效安全、针对性强的猪链球菌疫苗，解决生产实际问题已成为迫切需要。

由上海市动物疫病预防控制中心、南京农业大学组成的课题组自1998年以来，对我国猪链球菌病进行了系统地研究，并研制了猪链球菌灭活苗(猪链球菌2型＋马链球菌兽疫亚种)[2 3]。本试验的目的是为了检验猪链球菌灭活苗实验室产品的免疫效果，为疫苗的大批生产及推广应用提供参考数据。

1　材料与方法

1.1　试验用动物

试验用健康母猪和21日龄健康仔猪由上海市两个种猪场提供，两个猪场未接种链球菌疫苗，近两年也无链球菌病发生。15 g～20 g Balb/c小鼠购自上海复旦大学医学院。

1.2　试验用疫苗

实验室研制生产猪链球菌灭活疫苗(猪链球菌2型＋马链球菌兽疫亚种)5批，批号分别为20000125、20001214、20010226、20010312、20010327。经纯检、细菌计数及无菌检查合格后用于试验[4 6]。

1.3　攻毒菌株

C74 63马链球菌兽疫亚种(Streptococcusequisubsp.zooepidemicus，SeZ)，属兰氏分群C群，购自中国兽药监察所；HA9801猪链球菌2型(Streptococcussuistype 2，SS2)分离株，1998年8月从江苏省急性败血症死亡猪的实质器官中分离[7]，中国兽医药品监察所鉴定，上海市动物疫病预防控制中心保存。

1.4　免疫效力检验

1.4.1　小鼠效力检验　每批疫苗皮下注射15 g～20 g Balb/c小鼠20只，每只0.2 mL,15 d后加强免疫1次，每次0.2 mL，间隔14 d后，与对照小鼠10只，每组再分成2组(每组5只)，分别用HA9801和C74 63攻毒，攻毒方法：腹腔注射2 LD50(5.5×102cfu)剂量的C74 63强毒菌液，腹腔注射2 LD50(1.2×108cfu)剂量的HA9801强毒菌液。观察10 d。

1.4.2　仔猪效力检验　每批疫苗取妊娠母猪2头，分别于产前35 d～40 d和15 d～20 d各肌肉注射1次，每头3 mL。产仔后随机选出4头～5头仔猪人工哺乳作为对照。其余仔猪在吮食免疫母猪乳，仔猪3日龄时连同对照组，攻击2 LD50(4×107cfu)剂量的C74 63强毒菌液、2 LD50(1.5×109cfu)剂量的HA9801强毒菌液，观察10 d。

1.4.3　保育猪效力检验　20000125批疫苗肌肉注射21日龄健康猪20头，其他批次疫苗各接种10头，每头2 mL,20 d后加强免疫1次，免疫剂量及免疫途径与首免一样。间隔15 d后，连同对照组，攻击2 LD50(4×107cfu)剂量的C74 63强毒菌液、2 LD50(1.5×109cfu)剂量的HA9801强毒菌液，观察10 d。

2　结果

2.1　小鼠效力检验

Balb/c小鼠经5批疫苗20000125、20001214、20010312、20010226、20010327免疫接种试验后，用猪链球菌2型HA9801株和马链球菌兽疫亚种C74 63株攻毒，疫苗平均保护率分别为90%(45/50)、74%(37/50)对照组全部死亡或发病(表1)。

表1　Balb/c小鼠的攻毒保护试验

Table 1　Protective test againstStreptococcusin Balb/c mice

批次

Batch

组别

Groups

猪链球菌2型(SS2)

马链球菌兽疫亚种(SeZ)

试验数

Mice No.

发病数

Sick No.

死亡数

Dead No.

保护率/%

Protective rate

试验数

Mice No.

发病数

Sick No.

死亡数

Dead No.

保护率/%

Protective rate

20001214

免疫组Immunization

10

1

1

90

10

2

1

80

对照组Control

4

4

4

0

4

4

4

0

20010312

免疫组Immunization

10

2

1

80

10

3

2

70

对照组Control

4

4

3

0

4

4

4

0

20000125

免疫组Immunization

10

1

1

90

10

4

2

60

对照组Control

4

4

4

0

4

4

4

0

20010226

免疫组Immunization

10

0

0

100

10

1

1

90

对照组Control

4

4

3

0

4

4

4

0

免疫组Immunization

10

1

0

90

10

3

2

70

对照组Control

4

4

4

0

4

4

4

0

总计Total

50

5

3

90

50

13

7

74

2.2　仔猪效力检验

哺乳仔猪经猪链球菌2型HA9801株和马链球菌兽疫亚种C74 63株攻毒后观察10 d,5批疫苗20000125、20001214、20010312、20010226、20010327的平均保护率分别为88.09%(37/42)、79.06%(34/43)，对照组全部死亡(表2)。

表2　哺乳仔猪免疫效力试验

Table 2　Immune efficacy test againstStreptococcusin sucklingpiglets

批次

Batch

组别

Groups

猪链球菌2型(SS2)

马链球菌兽疫亚种(SeZ)

试验数

PigNo.

发病数

Sick No.

死亡数

Dead No.

保护率/%

Protective rate

试验数

PigNo.

发病数

Sick No.

死亡数

Dead No.

保护率/%

Protective rate

20001214

免疫组

Immunization

8

1

1

87.5

10

3

2

70

对照组

Control

2

2

2

0

2

2

2

0

20010312

免疫组

Immunization

7

1

0

85.7

8

2

1

75

对照组

Control

2

2

2

0

2

2

2

0

20000125

免疫组

Immunization

9

1

1

88.9

10

2

2

80

对照组

Control

2

2

2

0

2

2

2

0

20010226

免疫组

Immunization

8

1

0

87.5

7

1

0

85.7

对照组

Control

2

2

2

0

2

2

2

0

20010327

免疫组

Immunization

10

1

0

90

8

1

1

87.5

对照组

Control

2

2

2

0

2

2

2

0

总计

Total

30

3

1

90

30

7

5

76.7

2.3　保育猪效力检验

经5批疫苗20000125、20001214、20010312、20010226、20010327免疫接种试验后，用猪链球菌2型HA9801株和马链球菌兽疫亚种C74 63株攻毒，疫苗对保育猪的平均保护率分别为90%(27/30)、76.7%(23/30)，对照组全部死亡(表3)。

表3　保育猪免疫效力

Table 3　Immune efficacy test againstStreptococcusin nursing pigs

批次

Batch

组别

Groups

猪链球菌2型(SS2)

马链球菌兽疫亚种(SeZ)

试验数

Mice No.

发病数

Sick No.

死亡数

Dead No.

保护率/%

Protective rate

试验数

Mice No.

发病数

Sick No.

死亡数

Dead No.

保护率/%

Protective rate

20001214

免疫组Immunization

5

1

0

80

5

1

1

80

对照组Control

2

2

2

0

2

2

2

0

20010312

免疫组Immunization

5

0

0

100

5

1

0

80

对照组Control

2

2

2

0

2

2

2

0

20000125

免疫组Immunization

10

1

1

80

10

3

2

70

对照组Control

2

2

2

0

2

2

2

0

20010226

免疫组Immunization

5

0

0

100

5

1

1

80

对照组Control

2

2

2

0

2

2

2

0

20010327

免疫组Immunization

5

1

0

80

5

1

1

60

对照组Control

2

2

2

0

2

2

2

0

总计Total

30

3

1

90

30

7

5

76.7

3　讨论

R群猪链球菌2型与C群马链球菌兽疫亚种是当前我国猪链球菌病的两种主要病原[7 8]。随着养猪业规模化程度的不断提高，同时由于近年来猪繁殖与呼吸综合征、猪圆环病毒2型感染等疫病的发生与流行，使猪链球菌病呈明显的上升趋势，严重威胁养猪业的发展[9 10]。国内已有商品化的C群马链球菌兽疫亚种弱毒疫苗，而猪链球菌病灭活苗(猪链球菌2型＋马链球菌兽疫亚种)目前尚无产品面市。

本研究利用从江苏病猪体内分离的R群猪链球菌2型强毒株HA9801与C群马链球菌兽疫亚种强毒株ATCC35246，共制备了5批猪链球菌病灭活苗(猪链球菌2型＋马链球菌兽疫亚种)。灭活疫苗二次免疫后用猪链球菌2型及其马链球菌兽疫亚种强毒攻击，对哺乳仔猪的保护率分别达到88.09%(37/42，SS2)和79.06%(34/43，SeZ)，对保育猪的保护率分别达到90%(27/30，SS2)和76.7%(23/30，SeZ)，表明灭活疫苗对哺乳仔猪、保育猪均有良好的免疫保护作用。用Balb/c小鼠进行了免疫攻毒保护平行试验，结果对小鼠的保护率分别达到90%(45/50，SS2)和74%(37/50，SeZ)，与哺乳仔猪、保育猪显示了良好的一致性，表明猪链球菌灭活苗(猪链球菌2型＋马链球菌兽疫亚种)的免疫效果良好。

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